Cryofracture et Ombrage (technique du MEB)

 

La PCR : la « polymerase chain reaction »

La PCR : la « polymerase chain reaction »

PCR est l’abréviation anglaise de Polymerase Chain Reaction. En français cela se traduit par « Réaction en chaîne par polymérase ». Après sa première publication en 1986, le biochimiste américain, Kary Banks Mullis, obtint le prix Nobel en 1993 pour son invention qui, aujourd’hui s’avère indispensable dans tout laboratoires de génétique.

La méthode PCR a pour but d’amplifier l’ADN. Il est à noter que cette méthode peut agir même si les quantités d’ADN sont extrêmement petites (nano gramme). On constate que l’efficacité de cette méthode est aussi sont point faible : en effet, elle peut amplifier une particule  d’ADN étrangère.

La méthode PCR comporte plusieurs cycle. Un cycle est décomposé de 3 étapes (A) :

 

a) L’étape 1 de dénaturation

Le fragment d’ADN est dénaturé. C'est-à-dire que les liaisons hydrogènes qui relient les deux brins d’ADN sont rompus sous l’action de la chaleur (95°). L’ADN double brin est donc transformé en simple brin.

 

 b) L’étape 2 d'hybridation ou phase d'appariement des amorces

 A la suite de la dénaturation, on obtient deux brins d’ADN. La température descend à environ 55-60°C. Sur ces deux brins d’ADN vont se fixer des amorces. Ces amorces sont des oligonucléotides (un oligonucléotide est une courte séquence de nucléotides simple brin et long d’environ une dizaine de base). Les amorces introduites jouent le rôle de « cible » : elles se fixent sur les brin d’ADN et permettent ensuite à la polymérase de faire son travail.

 

c) L’étape 3 d'élongation

 La température remonte à 72°C, température a laquelle l’enzyme ADN polymérase fonctionne le mieux. La polymérase, partant de l’amorce, synthétise le brin complémentaire d’ADN. On obtient ainsi deux fragments d’ADN.

(A) Une PCR est réglée sur un rythme de changement des températures : Dénaturation à 95°C (1 à 60s) / Élongation de 55 à 65°C (1 à 60s)) / Hybridation à 72°C (5s à 125s)

(B) L’ADN en petite quantité a donc été multiplié par PCR et l’on obtient ainsi beaucoup plus de fragments ADN ( Nb(ADN)_{au cycle n} = 2ⁿ ; pour n cycles de PCR) strictement identiques à l’ADN prélevé.